高效高產(chǎn)慢病毒包裝試劑盒打破了慢病毒基因遞送的技術(shù)壁壘，大幅提升慢病毒包裝的效率及產(chǎn)量，為細(xì)胞基因治療CRO和CDMO賦能。科研工作者只需要根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行“傻瓜式”操作即可高效便捷地包裝出優(yōu)質(zhì)慢病毒，降低慢病毒的實(shí)驗(yàn)門(mén)檻，大幅簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程、縮短實(shí)驗(yàn)周期，助力細(xì)胞基因治療。
高效高產(chǎn)慢病毒包裝試劑盒打破了慢病毒基因遞送的技術(shù)壁壘，大幅提升慢病毒包裝的效率及產(chǎn)量，為細(xì)胞基因治療CRO和CDMO賦能。科研工作者只需要根據(jù)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行“傻瓜式”操作即可高效便捷地包裝出優(yōu)質(zhì)慢病毒，降低慢病毒的實(shí)驗(yàn)門(mén)檻，大幅簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程、縮短實(shí)驗(yàn)周期。該產(chǎn)品旨在打造“平民化”包裝優(yōu)質(zhì)慢病毒新時(shí)代，全面助力細(xì)胞基因治療。
高效高產(chǎn)慢病毒包裝試劑盒相較競(jìng)品，在滴度、效率和熒光等性能參數(shù)上均要優(yōu)于市面上的其他品牌，產(chǎn)品參數(shù)達(dá)到國(guó)內(nèi)國(guó)際先進(jìn)水平。該產(chǎn)品使得慢病毒包裝過(guò)程簡(jiǎn)易化僅需30分鐘，最快1天即可包裝出優(yōu)質(zhì)高滴度慢病毒，最快2天即可感染上靶細(xì)胞，最快4天即可篩選出感染效率達(dá)95%以上的穩(wěn)轉(zhuǎn)株，最快14天即可篩選出感染效率100%以上的單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株。該試劑盒內(nèi)核心工具、試劑均為自主研發(fā)，產(chǎn)品效果已得到眾多高校、醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室的大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
產(chǎn)品信息：
使用方法：
本試劑盒以1個(gè)10cm皿包裝量（1T）為例。
Day0：細(xì)胞鋪板
取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞狀態(tài)佳的293T細(xì)胞（如要達(dá)到最佳包裝效果需采購(gòu)慢病毒包裝專(zhuān)用馴化293T細(xì)胞，貨號(hào)MJ109），按8-10×106個(gè)/皿的細(xì)胞數(shù)量接種至10cm培養(yǎng)皿中，添加DMEM完全培養(yǎng)基至8-10ml，充分鋪勻，37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。293T細(xì)胞狀態(tài)對(duì)包裝病毒滴度影響較大，需確保293T細(xì)胞狀態(tài)良好且傳代代數(shù)較少才可獲得高滴度病毒。
Day1：慢病毒包裝
首次使用試劑盒，需用GFP positive ctl C（陽(yáng)性對(duì)照C）質(zhì)粒進(jìn)行病毒包裝來(lái)檢驗(yàn)自備293T是否適合病毒包裝（如包裝的病毒上清感染細(xì)胞沒(méi)有或者較少綠色熒光說(shuō)明自備293T細(xì)胞不適合包裝病毒，建議購(gòu)買(mǎi)佐潤(rùn)配套的293T細(xì)胞）。包裝前先將試劑盒內(nèi)Hi-EFF LentiTM mix A（試劑A）、Hi-YLD LentiTM mix B（試劑B）、GFP positive ctl C（陽(yáng)性對(duì)照C）和無(wú)血清、無(wú)雙抗opti-MEM培養(yǎng)基（或者DMEM培養(yǎng)基）恢復(fù)至室溫：
1．當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)，提前30min換液（換完全培養(yǎng)基，加不加雙抗都無(wú)影響）；
2．取1mL無(wú)血清、無(wú)雙抗的培養(yǎng)基置于EP管中，先加入40μL Hi-EFF LentiTM mix A（A使用前需震蕩充分或者手動(dòng)上下顛倒混勻），再加入40μL Hi-YLD LentiTM mix B，然后加入8μg目的質(zhì)粒或40μL GFP positive ctl C（陽(yáng)性對(duì)照C）質(zhì)粒，最后將以上混合液用力上下顛倒混勻10s左右，37℃培養(yǎng)箱靜置30min（靜置過(guò)程勿搖晃）；
3．將上述靜置后混合液緩慢上下顛倒混勻，用移液槍逐滴緩慢加入提前換過(guò)液的培養(yǎng)皿中，十字交叉法輕柔混勻，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
Day2：收集24h病毒上清
包裝后24h，將培養(yǎng)上清收集至離心管中并4℃保存，小心加入新鮮培養(yǎng)基8-10mL。
Day3：收集48h病毒上清
包裝后48h，將培養(yǎng)上清收集至離心管中（可根據(jù)情況繼續(xù)收集72h上清）。
Day4：病毒上清初步純化
將收集的病毒上清離心，3000rpm／min，4℃，離心10min，取上清，用0.45μm無(wú)菌濾器過(guò)濾，得到病毒上清原液，可直接進(jìn)行細(xì)胞感染，也可分裝后-80℃保存。
Day5：病毒感染目的細(xì)胞
通常情況下包裝病毒后24h和48h是病毒出毒高峰期，如追求效率，收集24h病毒上清后即可進(jìn)行病毒上清純化并直接進(jìn)行目的細(xì)胞感染。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)可在6孔板或3.5cm皿目的細(xì)胞密度達(dá)到50%左右時(shí)加入0.5-2ml病毒上清進(jìn)行感染，如感染效率較低可棄掉一半細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行二次或者三次感染并加入終濃度為5μg／mL的Polybrene（感染增強(qiáng)劑聚凝胺）直至感染成功。
Day6：穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選
以GFP positive ctl C（陽(yáng)性對(duì)照C）包裝病毒感染目的細(xì)胞篩選為例：上清感染目的細(xì)胞24h后只要看到綠色熒光或者48h達(dá)到50%以上綠色熒光即可添加Puromycin（表達(dá)篩選劑嘌呤霉素）進(jìn)行篩選，常規(guī)細(xì)胞推薦篩選終濃度為2.5μg／mL左右，實(shí)際篩選濃度以不感染病毒的空白細(xì)胞全部死亡為準(zhǔn)。
注意事項(xiàng)：
本產(chǎn)品僅供科研使用。包裝慢病毒及感染細(xì)胞建議在生物安全柜中進(jìn)行操作。