支原體檢測試劑盒MJ108是一種低成本、能快速高效定性檢測細胞培養(yǎng)上清、血清、培養(yǎng)基、疫苗半成品等溶液中的支原體基因組DNA,PCR擴增后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶有或無,與提供的滅活支原體基因組DNA作為陽性對照進行對比,即可判斷樣本是否被支原體污染,適用于科研及生物制品質(zhì)控。
產(chǎn)品信息:
檢測準備:
本產(chǎn)品檢測支原體需自備如下儀器與耗材:PCR儀、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、凝膠成像儀、1.5 mL無DNA EP管、超純水、0.2 mL PCR管或PCR八連管、瓊脂糖、TAE/TBE、DNA Marker(推薦100 bp ladder)。
使用方法:
1.收取待檢液體樣品(如貼壁細胞生長至80%左右,24h內(nèi)未換液的培養(yǎng)上清),取200uL在1.5mL 無DNA EP管中,100℃煮10 min;
2.將煮過的待檢樣品離心,12000 rpm/ 2-5min;
3.解凍支原體檢測試劑,輕輕敲打管壁混勻;
4.取10uL支原體檢測試劑加入PCR管中,再加入離心后的待檢樣品上清2.5uL混勻后瞬離,陽性對照和陰性對照(超純水)也按此操作;
5.按照以下程序跑PCR:
94 ℃ 4 min
94 ℃ 30 s
56 ℃ 30 s
72 ℃ 30 s 30 cycles
72 ℃ 10 min
4 ℃ ∞
6.電泳檢測:取10 μL PCR產(chǎn)物,1.5 %瓊脂糖凝膠(含GelRed/GelGreen)110 V/ 25 min;
7.凝膠成像儀拍照記錄;
8.結(jié)果判讀:
陽性:470 bp處出現(xiàn)清晰條帶(與陽性對照同位置);
陰性:470 bp處無條帶,陰性對照亦應無條帶;
無效:陽性對照無條帶或陰性對照470 bp處出現(xiàn)條帶。
注意事項:
1.本產(chǎn)品陽性對照為滅火支原體,但仍需視為潛在污染源,建議獨立區(qū)域加樣;
2.本產(chǎn)品為無菌狀態(tài),使用本產(chǎn)品時應注意無菌操作,避免污染;
3.本產(chǎn)品僅供科學研究使用。